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c-MET 的特征及于egfr的相关性

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发表于 2018-4-14 00:02:10 | 显示全部楼层 |阅读模式 来自: 中国上海
原癌基因 c-MET 位于人类 7 号染色体长臂(7q31),编码的间质表皮转化

因子(MET) 广泛表达于肺、肝、肾、胎盘、消化道等多种人类上皮组织,属

Ⅱ型酪氨酸激酶受体。MET 因磷酸化而被活化,生理情况下起着促进细胞分化、

胚胎形成及组织、器官创伤修复等生理作用,其异常活化可导致肺癌等多种肿瘤

的演进。HGF/c-MET 信号传导通路的异常激活有可能是肺癌发生、进展的机制

之一,常提示不良预后。在肺癌 EGFR-TKI 耐药机制研究中,c-MET 扩增学说

与 EGFR 的 T790M 二次突变学说成为被广泛接受的两个重要分子机制。以下将

对 c-MET 在肺腺癌中的作用及其与 EGFR 的相互关系加以讨论。

一 MET 的表达情况与活化水平

在100例肺源性腺癌标本中检出MET表达43例(43%),MET酪氨酸磷酸化位

点1234/1235 (p-MET 1234/1235)活化2例(2%)。处于活化状态的MET占MET阳性

表达样本的4.7%。通过对MET表达与临床、病理特征的分析我们还发现

MET在不吸烟人群表达率较高。在以往肺癌报道中,腺癌的MET表达率可达70%,

鳞癌约为40%。

MET是由50KD的α亚基以及145KD的β亚基通过二硫键连接成的异二聚体

受体,主要表达于腺上皮细胞边缘。α亚基位于胞外,借助二硫键与β亚基胞

外区相连构成配体识别部位。β亚基分为胞外区、跨膜区和胞内区,胞内区具有

酪氨酸激酶活性,通过磷酸化酪氨酸残基诱发信号传导。当MET接收到胞外信

号后,磷酸根由磷酸化位点Tyr1234转移至Tyr1235,从而使自身活化。C’端

Tyr1349与Tyr1356是2个高亲和力信号换能Src同源区结构域酪氨酸位点,对信号

向胞内的传导起重要作用。本实验通过免疫组织化学的方法检测p-MET

1234/1235,发现在较多的MET表达阳性样本中仅少数为高磷酸化状态。这预示

着具有MET持续性活化的肿瘤才可能是由c-MET所驱动的,因为在MET低水平

表达的肺癌细胞系中,只有增加配体HGF才能够使MET磷酸化[10]。而部分肿瘤

细胞的MET基因异常则会导致MET蛋白具有不依赖配体HGF将自身活化的功

能,且较生理性的活化方式更持久、效能更强。

p-MET 阳性样本的 c-MET 基因异常可能是导致肿瘤发生及进展的重要原

因。Garofalo M 等发现 c-MET 高拷贝数及 MET 蛋白过表达与肿瘤增长的侵袭深度、转移潜能相关,提示较差预后。

二 MET GCN 的结果讨论

1. MET GCN 的检测结果分析

本研究的 71 例肺源性腺癌标本,通过 FISH 技术检出 c-MET GCN 异常 10

例(14.1%),包含扩增 ( amplification)与高度多染色体性(high polysomy)两种形

式。其中包含 c-MET 扩增 2 例(2.8%),c-MET 高度多染色体性 8 例(11.3%)。

c-MET 扩增阳性占总例数的 2.8%。经统计分析未发现与 c-MET 扩增率相关

联的临床及病理特征,实验结果与报道相近。在关于未接受 TKI 类药物治疗人

群 c-MET 扩增率的文献报道中,亚裔人群 c-MET 扩增率普遍偏低:肺腺癌中为

4.0%,NSCLC 中为 5.6%和 1.4%;欧裔人群中法国

学者 Beau-Faller M 检测的 106 例欧裔 NSCLC 患者中 21% 存在 c-MET 扩增阳性

(22 例)

,c-MET 扩增与各项临床及病理特征无关。

c-MET 高度多染色体性占总例数的 11.3%,M 分期是其影响因素,有远处

转移的样本中 c-MET 高度多染色体性的检出率较高。检出率与亚裔 NSCLC 患

者已有报道相近 12.8%



2. MET 的扩增与磷酸化

本研究中检出的p-MET阳性2例,这2例样本同时存在c-MET扩增及编码蛋白

的高度磷酸化,p-MET与MET扩增表现出高度的一致性。由此可见c-MET扩增是

导致所编码受体蛋白高度持续性活化的重要原因。而Onitsuka T等认为p-MET阳

性在HGF表达阳性的样本中更容易检出,但未发现p-MET与临床特征及MET扩增

具有相关性[4],与本实验c-MET扩增与磷酸化相关性的结论不一致。

对MET活化方式的讨论有助于对结论差异的分析。p-MET 1234/1235的磷酸

化表示MET受体被激活,c-MET基因异常是导致MET非HGF依赖性激活的机制。

MET的活化方式多样,除了通过与配体HGF结合的方式外还可通过非HGF依赖

性的机制或借助其他膜受体分子达到持续性激活及信号通路放大的效应。

HGF是MET的唯一配体,局限分布于间质细胞。生理情况下通常以旁分泌

HGF的形式结合MET发挥生理作用,开放HGF/c-MET信号通路的效应时间较短;

在肿瘤细胞中MET的持续性活化机制与生理情况下的机制有所不同,多为自分

泌[15],以正反馈的形式结合肿瘤基质细胞分泌的HGF激活通路[9]。如肾癌及结直肠癌等,HGF/c-MET信号通路被高度持续性激活。

肿瘤细胞中c-MET基因扩增、增强转录及转录后的调节可引起MET高表达,

而c-MET基因异常还可以导致MET被非HGF依赖性地活化。分析其非依赖HGF

的活化方式主要有三种机制:TPR序列,TPR序列所编码的TPR蛋白家族含

有34个氨基酸重复序列,功能复杂,可通过形成特定空间结构影响蛋白质间的相

互作用。当基因重排时1号染色体TPR序列、启动子及7号染色体的MET序列形成

嵌合基因TPR-MET,而TPR编码的亮氨酸拉链结构可导致MET被持续性活化;(2)

缺少磷酸化酶,c-MET基因点突变或缺失可能导致磷酸化酶的缺乏影响MET去磷

酸化过程而得以持续性激活;(3) 转录异常导致细胞表面的MET成为单体形式,

具有持续性酪氨酸残基活化特性。

MET可借助其他膜表面分子使活化效应放大。黏附分子CD44是广泛分布于

细胞表面的跨膜糖蛋白,参与肿瘤的演进过程。邵铁良等发现在肺鳞癌组织中

c-Met与CD44的表达呈显著正相关,两者表达高于正常及癌旁组织。CD44在MET

激活中起重要作用,通过结合HGF并与MET形成复合体来协同促进肺鳞癌侵袭

转移。CD44与其配体透明质酸结合并结合HGF、MET的活化效应远大于单纯

的HGF活化效应。

不同机制所导致的MET磷酸化放大效应将引起MET信号通道高度、持续性

开放,使细胞具有恶性分化潜能。p-MET较低的阳性率与样本活化机制的不同是

导致扩增与激活相关性结论存在差异的可能原因。

3. MET 高基因拷贝数的判断标准及 MET 高度多染色体性的意义

本实验未发现MET扩增及高GCN与年龄、性别、吸烟史及组织差异的相关

性,与部分报道相同。GCN检测的方法较为多样,PCR与FISH技术应用较为

广泛。未接受靶向药物治疗的NSCLC中MET扩增的阳性率约为5%,实验中仅检

出2例为MET扩增,而部分文献报道其扩增率可达20%。究其原因,除人种差异

外可能归因于检测方法的不同。FISH技术可避免PCR及Southern blot技术在对高

度多染色体性与扩增进行区分时的局限性,通过将分别代表互补于着丝粒与目标

序列的基因探针精确定位于染色体,并以不同颜色的荧光信号显示在图像上,从

而更加直观、准确地判断实验结果。

在进行 FISH 的阳性实验结果判断时,标准的不同将导致诊断结论的偏差。高度多染色体性作为 GCN 异常的一种表现形式,是否划分为阳性结果仍存在争

议。HER2 的 FISH 检测在临床应用较广泛,诊断标准相对成熟。当肿瘤细胞检

出 17 号染色体信号伴随 HER2 基因拷贝信号同时增多时,若两者比值小于 1.8

将被认定为阴性。然而在 EGFR 的 FISH 检测中 Cappuzzo F 认为 EGFR GCN

的增加(包括高度多染色体性与扩增)是 NSCLC 患者接受 EGFR-TKI 治疗敏感性

及预后判断的有效预测指标。在肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,

CCRCC)中,EGFR 高度多染色体性可能是 EGFR 连续性膜高表达的原因并提示

着较差预后。在本研究中 MET 高度多染色体性是与肺腺癌较强转移性有关的因

素(P=0.011),而 c-MET 扩增例数少,尚不能确认 c-MET 扩增与转移性是否存在

联系。由此可见目的基因不同 FISH 诊断标准不能一概而论,MET 高 GCN 的 FISH

阳性可能不同于 HER2 的评定标准,将高度多染色体性判断为 MET 高 GCN 阳

性有一定依据。

三 MET 与 EGFR 的讨论

1. MET 高表达与 EGFR 突变所导致的生物学功能差异

本研究所使用的肺源性腺癌标本包含肺、淋巴结、胸膜三种组织类型,在进

行实验结果与组织来源分析时发现:三种组织来源的 MET 表达情况无统计学差

异(P>0.05);EGFR 突变情况在不同组织来源的检出率存在差异(P<0.05),在胸

膜组织的检出率明显高于肺与淋巴结。相对于无转移的肿瘤样本,具有远处转移

的肿瘤常常伴有 MET 过表达,但这种转移特性与 EGFR 突变无相关性[11]。有理

由推测 MET 高表达与 GCN 增高常导致肿瘤转移潜能增强,EGFR 突变则更易提

高肿瘤的侵袭能力,两者所导致的肺腺癌细胞生物学功能存在一定差异。

2. 靶向治疗前肺腺癌组织中 MET 与 EGFR 的相关性

总体样本中 2 例为 MET 扩增阳性,并且分别存在 19-del 及 L858R 两种 EGFR

突变。这个发现与部分文献的结论存在差异,Onitsuka 等对 183 例未接受过

EGFR-TKI 类药物治疗的肺腺癌组织进行检测,未发现 EGFR 突变与 MET 扩增

同时存在的样本,其结论与 Onozato 等相一致,认为 EGFR 突变与 MET 扩增的

出现具有彼此排他性独立存在的关系。

产生这个分歧的原因有以下三个可能:(1) 样本例数相对MET的扩增率而言

较小。明确EGFR-TKI类药物治疗前EGFR突变与MET扩增存在的具体关系需大样本、多中心的全面分析。(2) 检测方式不同而导致实验结果的差异。目前普遍

认为标本突变序列的实时荧光定量聚合酶链反应(Realtime fluorescence

quantitative polymerase chain reaction,RTFQ PCR)或测序法是EGFR突变检测的可

信方法;而GCN检测则常用FISH技术,可通过观察精确到染色体的目的基因定

位图像来获得直观、准确地诊断结果。不同人种的基因差异。如EGFR突变

在亚裔人非吸烟女性更为常见一样,对于MET扩增率高的人群特征仍没有共识。

有待于全球范围针对不同人群的进一步研究。

基于不同检测方式,MET与EGFR表现出了一定的关联性:Go H通过FISH

技术检测亚裔NSCLC患者发现MET阳性显示出与EGFR阳性的显著相关性

(P=0.003)

[5],Beau-Faller,M通过实时荧光定量PCR(Quantitative relative real-time

polymerase chain reaction)的方法检出9例同时存在MET与EGFR的扩增(8.5%,

9/106)[14]。所以MET有可能在TKI类药物治疗前即为扩增状态而引起所编码蛋白

高度活化,并且可以与EGFR突变同时存在。此时MET-TKI的应用将提升患者对

EGFR-TKI的反应性,改善患者的预后。在MET-TKI应用于临床时,进行EGFR

与MET两个指标的联合检测对判断肿瘤生物学行为、药物敏感性及预后是必要

的。

3. 基因异常与EGFR-TKI获得性耐药

易瑞沙、特罗凯这两个经典EGFR-TKI类药物顺利进入临床应用,为肺癌的

治疗带来了新的突破。在随后开展的的靶向药物获得性耐药机制研究中,EGFR

T790M突变学说及c-MET扩增学说得到了公众的广泛接受。

3.1 T790M突变的机制

本研究的EGFR检测结果中,3例为T790M突变阳性,其中1例(1.0%)同时具

有19-del敏感突变。可以认为EGFR的敏感突变能够与耐药突变同时存在。当接

受EGFR-TKI治疗的患者出现T790M突变将导致:(1) 激酶区ATP结合部位空间

构象改变,将增加ATP与激酶区的亲和力,削弱EGFR-TKI与ATP竞争结合激酶

区的能力[2]。(2) 胞内EGFR激酶区结合ATP的能力增强,与TKI的亲和力减弱[22]。

肿瘤生长所经历的多次分裂增殖,使子代细胞产生了分子生物学上的改变,

导致相同肿瘤类型在不同个体上的分子生物学差异,甚至同一个体中的肿瘤细胞

也可以存在不同的基因型或者组织学亚型,从而使肿瘤具有不同的生长、侵袭特性及预后、药物敏感性等方面的差异。这种肿瘤异质性是恶性肿瘤的一大特征。

基于肿瘤异质性理论,通过对未接受靶向药物治疗且具有EGFR敏感突变的

NSCLC组织进行基因测序、肿瘤细胞芯片及PCR(提高扩增循环数,以提高敏

感性)

[24]等检测,在部分EGFR敏感突变标本中同时检测到具有耐药突变-T790M。

Bai H应用激光捕获微切割技术从42例EGFR突变及37例野生型肿瘤组织采得

2506个肿瘤焦点进行EGFR检测。检出38%存在异质性,而62%(49/79)只

包含EGFR突变或EGFR野生型。在37例野生型肿瘤中有4例样本(10.8%)检出突变

(3例EGFR 19突变,1例EGFR 21突变)



这一系列注重微克隆集落的实验证明 T790M 突变在用药前已经存在。经过

TKI 药物的选择作用,对药物敏感的组织类型被抑制,而非敏感的其他组织类型

(如 T790M)被选择性地保留了下来,经过多次分裂增殖后得以富集。

3.2 MET扩增的机制

在随后的获得性耐药机制研究中Engelman等发现c-MET扩增可能是导致耐

药出现的机制之一,在他的研究中耐药病例的c-MET扩增率达20%

[3],而未接受

过EGFR-TKI类药物治疗的肺腺癌人群中MET扩增率极低。Bean在对gefitinib或

erlotinib产生获得性耐药的人群中进行了MET扩增检测,其阳性率达到了21%,

而治疗前仅3%检出MET扩增[26]。本研究结果中总样本2.8%的扩增阳性率与上述

一致,是c-MET扩增致EGFR-TKI获得性耐药学说的有力论据。

MET扩增阳性样本在耐药前后样本检出比例的差异可能是由于EGFR TKI阻

断EGFR活化后,肿瘤通过上调MET表达以广泛激活erb-B-3/PI3K/Akt信号途径使

EGFR下游通路活化。MiRNA可能参与了EGFR与MET的功能调节,对细胞经TKI

类药物治疗的敏感性产生影响,与EGFR-TKI诱导的细胞凋亡密切相关。在对下

调EGFR与MET基因的细胞株进行miR芯片筛查时Garofalo发现miR-103、

miR-203只受MET调节,其缺失与初期肺癌的转移能力相关,被下调后可激活

AKT-ERK信号通路,从而导致细胞对吉非替尼的敏感性降低。miR-221、miR-222、

miR-30b、miR-30c受EGFR及MET的共同调节,被同时上调后可抑制PTEN等抑

癌基因,起到调控细胞迁移,促进EMT进而导致耐药的作用[11]。有报道在MET

扩增的肺癌细胞系,PI3K信号通路会被优先激活以保证肿瘤细胞能存活下来[27]。

EGFR的表达没有改变,而与增殖、抗凋亡相关的基因表达被上调并活化。这种EGFR旁路TK信号通路的替代性激活最终导致NSCLC对TKI产生耐药。

四.临床意义

近年来随着人们对肿瘤个体化治疗的重视以及基因检测技术的进步,

NSCLC 的肿瘤驱动基因被陆续发现,肿瘤基因谱日趋完善。时至 2012 年,94.2%

的非吸烟患者可明确其驱动基因。由于 MET 是导致 EGFR-TKI 获得性耐药的机

制之一,并且提示患者的不良预后,所以对 MET 的临床与基础研究具有重要意

义。肿瘤的侵袭与转移常常是导致癌症患者死亡的主要原因,对 MET 的干扰可

能是解决这一问题的希望。目前 MET 激酶抑制剂已在研发,如 K252a[28]、

SU11274、PHA-665752等,ARQ197、Foretinib 等药物,已成功进入第 2 阶

段临床试验。作为靶向治疗新靶点,大样本的检测结果有助于对用药人群特征的

把握以及新的个体化靶向治疗策略的完善。本研究的内容有助于对肺腺癌生物学

行为的评估,对患者预后判断具有重要意义。MET 的抑制剂如 MET-TKI、甚至

miRNA 干扰配合 EGFR-TKI 的治疗方法有可能成为未来靶向治疗的新策略。

                         结论

1. c-MET 多表达于不吸烟的肺腺癌人群,持续性磷酸化状态的样本在 MET

表达阳性样本中比例较低;

2. c-MET 高拷贝数,尤其是 MET 扩增对肺腺癌的发生、发展起重要作用,

预示着肿瘤具有较强的转移潜能;基因扩增是导致 MET 所编码蛋白过表达并且

呈 p-MET 1234/1235 高度活化状态的重要原因;

3. 未经 TKI类药物治疗的肺腺癌患者中 MET 扩增可以与 EGFR 突变同时存

在,共同介导肿瘤的发生、发展过程;MET 与 EGFR 的联合检测将有助于指导

靶向用药及预后评估。
有爱,就有奇迹!
发表于 2018-5-6 21:39:09 | 显示全部楼层 来自: 中国河北
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有爱,就有奇迹!
 楼主| 发表于 2018-5-6 22:08:45 | 显示全部楼层 来自: 中国上海
向伟 发表于 2018-5-6 21:39
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有爱,就有奇迹!
发表于 2018-5-8 08:39:06 | 显示全部楼层 来自: 中国河北廊坊
猫有九条命 发表于 2018-5-6 22:08
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需要回答问题,不知道能不能通过
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