BIBW2992的疗效~请问靶向药物BIBW2992中“不可逆性”是什么意思？？

happywfh

BIBW2992(TOVOKTM)：它是第二代高效双重非可逆性的酪氨酸激酶抑制剂。

[ 本帖最后由 happywfh 于 2010-12-29 10:47 编辑 ]

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本文研究的是肿瘤细胞耐药机制。

关于肿瘤细胞耐药的机制已经发现很多种。比如药物流出，即肿瘤细胞获得将药物排出细胞外的能力，从而使得药物无法发挥作用。药物靶点突变，即药物作用的位点突变，使得药物即使进入细胞，也无法发挥作用。这两种机制的特点是：低概率，随机性，有自然选择的含义。

但是越来越多的证据表明耐药性的产生也有非突变的机制。例如有证据表明肿瘤中存在一小部分“肿瘤干细胞”，他们对多种抗癌药物具有抗性，可能通过药物流出的机制。还有研究表明耐药与表观遗传有关。表观遗传学又称“拟遗传学”、“表遗传学”、“外遗传学”以及“后遗传学”（英文epigenetics），是一门生物学学科，研究在没有细胞核DNA序列改变的情况时，基因功能的可逆的、可遗传的改变（来自wikipedia）。常举得例子是：人的一生生老病死，DNA序列变化并不大，但大至整体，小至细胞基因功能都发生了巨大的变化，研究这些变化的机制就是表观遗传学。研究发现肿瘤细胞耐药的产生并不必须稳定的可遗传的遗传改变。事实上确实如此，肿瘤治疗中已经发现这样的现象：再治疗反应——即已经耐药的肿瘤在脱离了该类药物一段时间后，对该药物的耐药性会消失，说明这种耐药性并不是不可逆的突变造成的。例如一些非小细胞肺癌患者在接受表皮生长因子（EGFR：epidermal growth factor receptor）酪氨酸激酶抑制剂（TKIs：tyrosine kinase inhibitors）反应良好（即有效果）一段时间后，会出现耐药性；而当一段时间停用该药物后，重新接受该种药物，又会反应良好，称为“再治疗反应（re-treatment responses）”。

作者使用了多种人类的肿瘤细胞系，他们分别有不同的药物敏感性，然后用致死剂量的药物刺激，得到耐药株（DTPs：drug-tolerant persisters）细胞，发现耐药性细胞的比例远高于突变的概率，这提示着表观遗传改变。并且发现这种耐药性是短暂的获得的，当停止用药一段时间后，这种耐药性消失。当作者检测药物靶点的改变时发现，耐药细胞靶点对药物反应正常，说明既没有药物流出也没有药物靶点的突变。当检测耐药株的肿瘤干细胞的标志物（marker）时,发现的确存在着这些标志。但耐药株跟肿瘤干细胞的关系还是很复杂，作者没有深入的做下去。作者重点从表观遗传的角度，进一步阐明了肿瘤细胞耐药性的机制。指出了该耐药性的产生跟胰岛素样生长因子-1（IGF-1）受体通路有关，而且发现有染色体重塑，并且发现该染色体重塑跟一种组蛋白去甲基化酶RBP2/KDM5A/Jarid1A（下称为KDM5A）被上调有关。这提示我们，抑制IGF-1受体通路，抑制KDM5A，针对染色体重塑用药，都可能降低肿瘤患者耐药性的产生。

主要实验过程如下：

耐药性细胞亚群的检测

PC9是一种非小细胞肺癌，这种细胞系EGFR突变，对EGFR TKIs的反应良好。当使用100倍于其IC50浓度9天后，依然有少数细胞存活，称之为DTPs（drug-tolerant persisters）。同时，作者在M14、Colo 205、MDA-MD-175 v2、SKBR3、HCC 1419、KATO等细胞系做了类似的实验，得到了一致的结果。而且，当用顺铂（抗癌药）作用于PC9细胞系时，得到相同结果。因此证明在很多种细胞系中，都存在这耐药性细胞亚群。

虽然80%的DTPs 是静止期的，20%的细胞在药物存在的情况下正常的增殖，并形成克隆，称之为耐药增殖株（DTEPs：drug-tolerant expanded persisters）。DTEPs对药物的敏感程度只有PC9的1/500。无论DTPs还是DTEPs，EGFR TKIs都抑制了EGFR激酶的活性，说明耐药性产生与药物流出无关。一些非小细胞肺癌患者EGFR T790M突变、MET扩增跟其耐药性有关，本实验中也未发现二者的突变，说明跟突变无关。用EGFR TKIs建立起的耐药株同时对顺铂也产生了耐药性，可能说明该耐药性的产生没有同路的特异性。

耐药性跟肿瘤细胞个体的异质性有关

考虑到报道的耐药性与“肿瘤干细胞（CSC：cancer stem cell）”的关系，作者检测了CSC的标志。PC9中CD133+细胞比例是2%，DTPs中为100%。DTPs CD24+。然而二者同为CD44+。因此说明，肿瘤细胞确实存在着异质性，少数DTPs能够抗击大多数细胞不能抵抗的药物浓度。值得注意的是，DTEPs与PC9有着相似的CD133、CD24表达谱，说明有DTPs向DTEPs转化过程中，异质性重新建立。

耐药性表形能够重头出现，并且是可逆的

从PC9细胞系中随机挑单克隆并增殖（N次试验，挑中对药物敏感的细胞的几率几乎是100%的），形成新的细胞系，作者发现这种细胞系跟PC9一样能够形成DTPs、DTEPs，并且几率是相同的，说明耐药性表形能够重头出现。类似的实验，在其他几种细胞系中重复得到一致的结果。

DTPs在没有药物的培养基中培养后，重新获得了对EGFR TKIs的敏感性，说明这个过程是非突变的，可逆的。类似的实验在其他几种细胞系中重复得到一致的结果。并且发现，耐药性的丧失都是在30代左右突然出现的，说明这种耐药性的解除是瞬时性的，并且，一旦耐药性解除，DTEPs与PC9有着相似的药物敏感性。

建立耐药性需要组蛋白去甲基化酶KDM5A

为了研究可逆性耐药性的机制，作者对PC9、PC9衍生DTPs、DTEPs作为比较基因组全基因表达分析（microarray）。作者发现这三种细胞系基因表达谱有很大的不同，而且染色体上基因表达的分别不是随机的，这就提示全基因组染色体的改变。三种细胞系的染色体对核酸酶的敏感性也有很大的差别，进一步提示染色体的改变。

为了寻找耐药株染色体改变的分子基础，作者分析了三种细胞系表达有差别的分子，找到一个在耐药株中上调的一个染色体修饰酶：KDM5A。这是个H3K4去甲基化酶。作者进而发现，DTPs中，H3K4甲基化降低。为了排除H3K4甲基化降低只是因为其是休眠期细胞，作者证明同样是休眠期细胞，只有耐药株H3K4甲基化降低。

为了验证耐药性需要KDM5A，作者设计了RNAi实验。PC9中敲掉KDM5A后，增殖性没有明显变化，但DTPs、DTEPs明显减少。PC9中敲掉KDM5A后，药物敏感性下降。证明耐药性的建立需要组蛋白去甲基化酶KDM5A

耐药性肿瘤细胞能被组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDAC Inhibitors）选择性杀灭

实验下一步设计应该是使用KDM5A特异性抑制剂验证上述实验，但是现在还没有这种药物。KDM5A能与HDAC结合，并且有证据表明KDM5A跟H3K9/K14乙酰化有关，所以作者进一步检测DTPs、DTEPs细胞组蛋白乙酰化改变。发现DTPs、DTEPs细胞H3K14乙酰化降低，因而作者认为TSA（一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂）可以模拟KDM5A特异性抑制剂的作用。实验发现，TSA对PC9细胞系作用不明显，但能够明显的杀死DTPs、DTEPs细胞。类似的实验在M14、Colo 205、HCC827、HT-29中都得到了一致的结果。

耐药株对TSA敏感是因为DNA损伤反应不同

DTPs、DTEPs TSA处理后，DNA损伤的标志物γH2AX明显的升高，而且这种升高不会被caspase inhibitor逆转，说明不是caspase通路介导的。TSA处理DTEPs细胞死亡能被检验点废除药物咖啡因逆转，说明这种死亡是检验点依赖性机制。

组蛋白去乙酰化活性的抑制能够抑制耐药性的发展

既然耐药性是可逆的，作者希望找到一些能够阻止耐药性产生的药物。作者使用了13种药物，发现四种组蛋白去乙酰化酶抑制剂（TSA、SAHA、MS-275和Scriptaid）和一种选择性IGF-1R抑制剂（AEW541）能够降低DTEPs。

耐药株出现需要IGF-1R信号的激活

鉴于选择性IGF-1R抑制剂能够降低DTEPs，作者进一步研究耐药性产生跟IGF-1R信号的关系。作者发现DTPs中IGF-1R磷酸化增加，并且发现IGFBP3（IGF-binding protein 3）上调。AEW541处理DTPs，IGF-1R磷酸化减少。PC9细胞系同时用EGFR TKIs和AEW541处理，阻止了DTPs的出现，而如果同时再加入IGF-1R的配体IGF-1，DTPs增加。在其它几种细胞系中也得到一致的结果。由此证明耐药性的产生需要IGF-1R信号的激活。

那么，IGF-1R信号的激活跟染色体的改变有什么关系呢？实验证明，同时使用EGFR TKIs和IGF-1处理PC9细胞系，DTPs增多；但当敲掉KDM5A后，该效应消失。DTPs中H3K4甲基化降低，但当使用IGF-1R抑制剂后，部分的恢复了。同时IGF-1R抑制剂能够下调KDM5A，说明IGF-1R跟KDM5A之间确实存在某种关系。

PC9细胞系同时用EGFR TKIs和AEW541处理，仍然有少数存活的细胞，作者实验证明，这些细胞是由于基因突变造成的，说明突变也是耐药性产生的一种机制。

抗击肺癌

听说过这个药现在好像还在临床没有上市。
据说是易瑞沙和特罗凯耐药后可选择该药。
希望上市能便宜点..

happywfh

BIBW2992中的“非可逆的”酪氨酸激酶抑制剂再结合上文中的“可逆的”意思，是说BIBW2992一旦耐药，不管停药多长时间，都不会再次起作用了，是这个意思吗？？

happywfh

我爸爸在服用2992,所以很关注。但是很担心里面提到的“非可逆的”的含义

happywfh

没有人在使用2992这种靶向药吗？希望用着的人共同来探讨用药的注意事项

ZSM123

我母亲是肺癌骨转移，服用药物后有口中生疮，腹泻等副作用，希望能一起探讨用药问题

永远的爸爸

你们这个药是哪里买的