简单说说基因检测的区别
下面给大家说说基因检测方法，基因检测目前的方法有四种分别是，ICH免疫组化法、FISH荧光原位杂交法、PCR一代测序法、NGS高通量二代测序法。先说说ICH免疫组化法，这种方法测的是蛋白的表达水平而不直接测基因水平，所以严格上来说不算是基因检测，基因的突变会引起相应蛋白的表达的升高通过蛋白表达的升高能够预测突变的水平，这种检测方式优势是检测廉价，但是缺陷尤其明显受限都不能确定突变性，蛋白表达与基因突变的重合率跟蛋白表达的程度直接相关，例如免疫组化下alk一个加号下与alk突变重合的概率只有15%，两个加号下与alk突变重合的概率只有55%，三个加号切下与alk突变的概率重合率基本才能达到90%。，第二个缺陷是无法确定突变类型。而且只能用组织检测，目前咱们单独最常做的就是PD-L1的蛋白性状表达就是基于ICH的。其次是FISH荧光原位杂交法，其原理简单解释为利用被检测的突变染色体能够与针对性的核酸探针特异性结合被标记，而正常的染色体不会产生结合，然后在显微镜下对被测样本进行定性、定量分析。其优势是绝对准确，完全能够准确测定突变。但是其缺陷也比较明显受限是价格相对昂贵，其次是测试是单一性的样本只能被标记一次，最后是虽然能检测到突变但是无法确定到底是何种突变，例如无法区分是alk融合还是alk点突变，这个比较关键因为只有alk融合基因的患者才对靶向药敏感，在如无法确定MET的形式，是点突变还是扩增等。
再次是PCR一代测序，先说说PCR其实就在在聚合酶的催化作用下将需要测量的DNA扩充到很大的数量上，再对其进行定量标记确定突变情况，其优势是敏感度高、特异性强、但是其也是有缺陷的，无法在有限的标本下实现高量额基因测序，且对某些罕见性突变无法测量，例如PCR能测量29种常见的EGFR突变，而目前已知的EGFR突变已经达到了接近50种。
二代测序其实就是在一代基础上实现一边合成一边测序，一旦上了测序平台机器下来后就只剩下做数据分析了，其优势是能够在有限的样本下实现高通量的多基因测序且性价比高，但是缺点也是有的它的敏感性不如FISH，但是目前其还是以其独到的优势被广泛接纳为最标准的测序方式，在说下二代测序的分类主要分为多重PCR、杂交捕获、分子倒置探针，其它方式更不主流目前多重PCR运用还是很多的，其优点在于高效性（检出速度提高一倍），经济性（检测价格对比其它二代测序便宜百分之三十左右。其核心原理和一代PCR反应和操作相同，但是可以在同一反应体上加入多重引物。就能检测多种突变形式，但也有缺陷首先是这种测序方式对外周血检测不行其次是不同的PCR厂商和不同的试剂盒制造商在进行扩增时候的反应结果相差明显，所以这种检测多数不检测扩增。所以基于此多重PCR多数都是用于患者初次检测或者可行的二次检测。
第二种是杂交捕获是根据DNA核算分子碱基对互补原理，探针能够和目标碱基结合，从而捕获目标链，随后将捕获的片段分开和二代测构成文库就可以做分析了。优势是覆盖范围广，提高了体液检测的检出率。受限少。分子倒置探针实际使用的也不多，它特异性高但是捕获DNA片段率对比杂交捕获低。所以总结起来NGS后期想检测更多耐药突变使用的是杂交捕获而初期一般多是多重PCR。
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